Gibco 10744019 成分確定的角質形成細胞無血清培養基用戶指南

一、產品概述

Gibco 10744019 成分確定的角質形成細胞無血清培養基（Defined Keratinocyte-SFM, DKSFM）是一款專為人類角質形成細胞（Keratinocytes）體外培養設計的無血清培養基。該產品通過化學限定配方替代傳統含血清培養基，避免批次差異和動物源性成分的潛在風險，廣泛應用于皮膚生物學、再生醫學、藥物篩選及化妝品研發等領域。

二、產品特點

1. 化學限定配方

• 所有成分明確且濃度固定，消除傳統血清培養基中批次差異和未知成分的干擾，確保實驗結果的可重復性。

• 不含牛垂體提取物（BPE），通過生長促進劑替代其功能，維持細胞形態和生理標志物穩定性。

2. 無血清優勢

• 避免血清來源的倫理問題和污染風險（如支原體、病毒、內毒素）。

• 降低實驗變量，提升數據準確性，尤其適用于藥物篩選和毒性測試。

3. 優化細胞增殖與分化

• 鈣濃度低于0.1 mM，支持高密度未分化角質形成細胞的分離和擴增。

• 配方可抑制成纖維細胞增殖，確保角質形成細胞的純度。

4. 標準化生產

• Gibco嚴格遵循GMP規范，確保每批次培養基成分和性能一致，滿足高可重復性實驗需求。

三、技術參數

• 產品編號：10744019

• 規格：500 mL（基礎培養基）+ 1 mL（生長添加劑）

• 儲存條件：

• 基礎培養基：2–8°C避光保存

• 生長添加劑：-5至-20°C避光保存

• 完整培養基（混合后）：2–8°C避光保存，有效期12個月

• 適用細胞類型：人類角質形成細胞、上皮細胞

• 血清水平：無血清

• 添加劑：含谷氨酰胺、酚紅

• 滅菌方式：無菌過濾

四、實驗應用指南

（一）實驗準備

1. 試劑準備

• 從冷藏箱中取出基礎培養基，從冷凍箱中取出生長添加劑，室溫平衡至融化。

• 在生物安全柜內，將1 mL生長添加劑緩慢加入500 mL基礎培養基中，輕輕顛倒混勻，避免產生氣泡。

2. 細胞準備

• 使用胰蛋白酶消化角質形成細胞，離心收集細胞沉淀，用新鮮DKSFM重懸細胞。

• 調整細胞密度至推薦范圍（如5×10? cells/cm2），接種于培養皿或培養瓶中。

（二）培養條件

1. 溫度與CO?

• 37°C，5% CO?，飽和濕度環境。

• 建議使用Gibco品牌CO?培養箱，確保環境穩定性。

2. 換液頻率

• 每2–3天更換一次培養基，觀察細胞生長狀態。

• 當細胞匯合度達到80%–90%時，進行傳代。

（三）傳代操作

1. 消化與收集

• 棄去舊培養基，用PBS清洗細胞后，加入適量胰蛋白酶消化細胞。

• 顯微鏡下觀察細胞變圓后，加入等體積含血清的培養基終止消化，離心收集細胞。

2. 接種與培養

• 用新鮮DKSFM重懸細胞，按1:3–1:5比例傳代至新培養皿中。

• 補充適量培養基，繼續培養。

五、質量控制與驗證

1. 無菌檢測

• 每批次培養基均通過無菌測試，確保無細菌、真菌或支原體污染。

2. 性能驗證

• Gibco對DKSFM進行嚴格的質量控制，包括細胞增殖率、形態維持、標志物表達等指標的驗證。

• 用戶可通過細胞生長曲線、免疫熒光染色等方法進一步驗證培養基性能。

3. 法規合規

• 該產品已提交主文件至FDA，符合生物制品生產質量管理規范（GMP）。

六、注意事項

1. 儲存與運輸

• 嚴格按照標簽指示儲存，避免反復凍融。

• 運輸過程中保持冷藏，確保產品穩定性。

2. 操作安全

• 本產品僅供科研使用，不可用于人體或動物治療。

• 操作時佩戴手套和護目鏡，避免接觸皮膚和黏膜。

3. 兼容性

• DKSFM適用于多種角質形成細胞系（如HaCaT、NHEK），但需根據細胞類型優化接種密度和培養條件。

4. 問題處理

• 若發現培養基渾濁、沉淀或細胞生長異常，請立即停止使用，并聯系Gibco技術支持。

七、應用案例

1. 皮膚再生研究

• 使用DKSFM培養人類角質形成細胞，構建三維皮膚模型，評估藥物對皮膚屏障功能的影響。

2. 藥物篩選

• 在DKSFM中培養原代角質形成細胞，測試化妝品成分的毒性和刺激性，確保產品安全性。

3. 腫瘤研究

• 研究角質形成細胞在皮膚癌發生中的作用，利用DKSFM維持細胞未分化狀態，模擬腫瘤微環境。